大鼠PAX2真核表达质粒构建及瞬时转染肾小管上皮细胞模型建立

• 作者: 吴玉斌 宫亮 李里
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 生物学
• 关键词: 核转录因子 真核表达质粒 肾小管上皮细胞
• 年，卷（期）: 2012,（35）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 35-38
• 分类号: Q782
• 字数: 3653字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2012.35.012

摘要

目的 为进一步研究核转录因子(PAX2)对肾小管上皮细胞的转分化调控机制提供依据.方法 真核表达质粒( PGC-FU) -PAX2真核表达质粒的构建:设计PAX2的引物,PCR法从单侧输尿管结扎大鼠肾脏中扩增出目的片段,酶切后定向连入PGC-FU载体,将该重组质粒转化到Ecoli感受态细胞中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增；通过PCR及基因测序检测其构建的正确性；PGC-FU-PAX2瞬时转染肾小管上皮细胞模型的建立:脂质体转染法将重组质粒转入肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),RT-PCR法、Western blot法分别检测NRK52E细胞PAX2基因、蛋白表达水平,确认PAX2基因的高表达.结果 RT-PCR法成功克隆大鼠PAX2基因,PCR扩增的片段长度为1 294 bp,含有重组质粒的阳性克隆菌液PCR扩增片段约为408 bp,其基因测序结果显示与预期片段大小一致,目的基因与预期基因序列的同源性为100％,说明PGC-FU-PAX2真核表达质粒构建成功.NRK52E转染的PGC-FU-PAX2质粒能够高表达PAX2,呈现绿色荧光,空载组和对照组NRK52E均未见PAX2高表达.结论 成功构建了真核表达载体PGC-FU-PAX2,建立了PAX2高表达肾小管上皮细胞模型,为PAX2对肾小管上皮细胞的转分化作用机制的研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴玉斌		122	469	11.0	15.0
2	李里		8	19	3.0	4.0
6	宫亮		27	57	4.0	6.0