人雌激素β受体RNAi反转录病毒载体在人成骨样MG63细胞中的表达☆

• 作者: 刘少华 刘金洋 吴建煌 唐明星 张宏其 王昱翔 邓盎 郭超峰 高琪乐
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 雌激素受体β RNA干扰 雌激素β受体-shRNA反转录 人成骨样细胞 反转录病毒载体 组织构建
• 年，卷（期）: 2012,（42）
• 页码范围: 7830-7836
• 分类号: R318
• 字数: 6534字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.42.008

摘要

背景:目前已有较多关于雌激素α受体基因如何参与骨代谢的研究,而对雌激素β受体基因如何参与骨代谢的研究则相对较少.目的:构建人雌激素β受体RNAi反转录病毒表达载体,并通过病毒介导其在人成骨样MG63细胞中表达.方法:根据GeneBank数据库提供的雌激素β受体基因核苷酸序列,选择设计3条针对人雌激素β受体干扰靶序列,并与pRNAT-H1.4/Retro质粒定向连接,构建真核表达载体pRNAT-H1.4/Retro-雌激素β受体-shRNA,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定.将pRNAT-H1.4/Retro-雌激素β受体-shRNA经脂质体转染至293细胞包装成反转录病毒.将包装好的反转录病毒,以空白及非特异性shRNA作为对照,感染人成骨样MG63细胞株.结果与结论:3个连接了雌激素β受体-shRNA的重组质粒经酶切鉴定分析证实目的序列己插入到预计位点,符合设计要求,测序鉴定表明重组质粒中含有针对雌激素β受体基因目的序列,表明重组质粒构建成功.并经脂质体转染至293细胞后成功包装成反转录病毒.反转录病毒载体能高效、稳定的感染人成骨样MG63细胞株,感染效率为70%左右.包装后的3种雌激素β受体-shRNA反转录病毒均能高效、稳定的感染人成骨样MG63细胞,并显著抑制雌激素β受体的表达.其中以雌激素β受体-shRNA3为最佳的干扰序列.