RPS14基因RNAi慢病毒载体构建及在SKM-1细胞中的表达

• 作者: 刘林 杨泽松 王利 罗静 肖青 蒋文
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓增生异常综合征 RPS14 RNA 干扰 慢病毒载体 SKM-1 细胞
• 年，卷（期）: 2012,（45）
• 页码范围: 8491-8495
• 分类号: R394.2
• 字数: 5017字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.45.024

摘要

背景:有研究表明,造血干/祖细胞内 RPS14表达减少可导致造血细胞病态造血,尤其是向红系分化受阻,提示 RPS14的正常表达有助于维持机体的正常造血. 目的:构建 RPS14基因 RNAi 慢病毒载体,并观察该基因在人骨髓增生异常综合征细胞株 SKM-1细胞中的表达. 方法:针对已经筛选确定的 RPS14基因 RNAi 有效靶序列,构建 GC-shRPS14慢病毒载体并测序鉴定.用GC-shRPS14、pHelper 1.0载体和 pHelper 2.0载体共转染包装细胞293T 细胞,包装产生慢病毒,测定病毒滴度;并将获得的 RPS14shRNA 慢病毒载体 GC-shRPS14转染人骨髓增生异常综合征细胞株 SKM-1,用 Western Blot 检测靶细胞内 RPS14蛋白的表达. 结果与结论:经测序证实,构建出了 RPS14shRNA 的慢病毒载体 GC-shRPS14.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×109 TU/mL.荧光显微镜下能直接观察到转染组细胞的 GFP 表达,转染效率为75%,Western Blot 检测到转染后 RPS14在靶细胞中表达明显被抑制.说明成功构建 RPS14基因 RNAi 慢病毒载体,转染人 SKM-1细胞株后 RPS14蛋白表达沉默.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘林	重庆医科大学附属第一医院血液科	96	300	8.0	14.0
2	王利	重庆医科大学附属第一医院血液科	68	142	7.0	9.0
3	杨泽松	重庆医科大学附属第一医院血液科	60	239	8.0	11.0
4	肖青	重庆医科大学附属第一医院血液科	62	161	6.0	10.0
5	罗静	重庆医科大学附属第一医院血液科	17	36	3.0	5.0
6	蒋文	重庆医科大学附属第一医院血液科	4	4	2.0	2.0