单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体真核表达载体的构建及表达★

• 作者: 吕芳彪 杨慧兰
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 单纯疱疹病毒Ⅱ型 潜伏相关转录体 开放读码框1 真核表达载体 转染 体外表达
• 年，卷（期）: 2012,（42）
• 页码范围: 7866-7870
• 分类号: R318
• 字数: 3596字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.42.015

摘要

背景:单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1真核表达载体的构建可以为研究单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1在病毒潜伏复发中的功能奠定基础.目的:构建含存单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1的真核表达载体,并通过转染非洲绿猴肾细胞(Vero),验证载体的体外表达情况.方法:根据单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1基因序列设计一对引物,以单纯疱疹病毒Ⅱ型333标准株基因组为模板PCR法扩增出开放读码框1基因,克隆至真核表达载体上,并进行酶切鉴定以及测序;利用X-fect转染试剂盒将重组质粒pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1转染vero细胞,RT-PCR检测其mRNA水平的表达,并用荧光倒置显微镜观察融合蛋白的表达.结果与结论:开放读码框1基因的体外扩增目的片段为741 bp,所构建的真核表达载体pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1经双酶切鉴定,与预期大小一致,测序结果与NCBI收录的开放读码框1基因序列一致;重组质粒pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1转染vero细胞后,RT-PCR 验证有目的基因的转录,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中表达.表明成功构建pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1真核表达载体,并且实现其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨慧兰	解放军广州军区广州总医院皮肤科	3	11	1.0	3.0
2	吕芳彪	华南理工大学生物科学与工程学院	4	2	1.0	1.0