pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒的构建及其在人神经胶质瘤U251细胞中的稳定过表达

• 作者: 严剑 李嘉杰 洪涛 邹树峰 闻海兵
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 神经胶质瘤 转染 质粒 连接蛋白43 逆转录聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 884-887
• 分类号: R739.4
• 字数: 3574字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2012.09.019

摘要

目的 建立稳定过表达pcDNA3.1/连接蛋白43(Cx43)重组质粒的人神经胶质瘤U251细胞系.方法 设计人Cx43的引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从低表达 Cx43的U251细胞中扩增出目的 片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒,经酶切、PCR、测序检测构建的正确性.采用脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,G418筛选出稳定转染的细胞系,采用RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染pcDNA3.1/Cx43重组质粒的U251细胞中Cx43基因、蛋白的表达水平.结果 酶切、PCR及测序表明pcDNA3.1/Cx43重组质粒构建成功,筛选获得稳定过表达Cx43的U251细胞.结论 构建了pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒及稳定过表达Cx43的U251细胞株,为下一步以Cx43为靶标进行人神经胶质瘤的基因治疗研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	洪涛	南昌大学第一附属医院神经外科	108	429	10.0	13.0
2	邹树峰	南昌大学医学院研究生院	6	13	3.0	3.0
3	严剑	南昌大学医学院研究生院	8	19	2.0	4.0
4	闻海兵	南昌大学医学院研究生院	2	5	2.0	2.0
5	李嘉杰	南昌大学医学院研究生院	3	5	2.0	2.0