棉花纤维RNA提取方法的比较及酵母双杂交文库的构建

• 作者: 夏涛 彭良才 徐雯 邓宗汉 陈婷婷
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 棉花纤维 改良热硼酸法 CTAB-PVP法 酵母双杂交文库
• 年，卷（期）: 2012,（30）
• 所属期刊栏目: 生物技术—研究报告
• 页码范围: 177-183
• 页数: 7页
• 分类号: Q71
• 字数: 6117字
• 语种: 中文

摘要

为了从棉花纤维中提取高质量的RNA用于构建酵母双杂交文库,采用4种不同的方法提取9天和19天棉花纤维的RNA.琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测结果表明:热硼酸法适用于初生幼嫩纤维和次生加厚纤维的RNA提取,CTAB-PVP法仅适用于初生幼嫩纤维的RNA提取,异硫氰酸胍法和高盐高pH值法提取的RNA由于杂质含量较多而影响反转录效果.采用热硼酸法大量提取总RNA,纯化后的mRNA反转录为cDNA,通过重组将扩增的cDNA片段定向插入到pGADT7-Rec AD克隆载体中,得到棉纤维9天和19天的酵母双杂交cDNA文库.2个文库的滴度分别是1.01×107 cfu/mL和8×106 cfu/mL,cDNA插入片段长度集中分布在250～2500 bp之间.由此可以看出,构建的2个棉纤维文库质量较高,可用于棉花纤维素合成和调控途径的研究.