MicroRNA-125a质粒表达载体的构建及其表达活性

• 作者: 张涛 李东 李华 高辉
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 表达载体 MicroRNA-125a 表达鉴定 pSuper 质粒
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 315-319
• 分类号: R318
• 字数: 5195字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.02.029

摘要

背景:pSuper是一种非编码RNA的真核表达载体,可在细胞质内表达miRNA前体,经过细胞自身的Dicer酶切后形成miRNA成熟体,其过程能够完全模仿细胞内源性miRNA形成过程.因此,利用pSuper表达载体构建一种肝癌抑制性miRNA:miR-125a的表达载体,为下一步研究其抗癌机制奠定了基础.目的:构建miR-125a的真核表达质粒pSuper-miR-125a,并验证其表达miR-125a的效率和特异性.方法:PCR扩增miR-125a前体(Pre-miR-125a)的目的片段,将其T-A克隆入pMD18-T过渡质粒载体,限制性内切酶切下目的片段,连接入pSuper质粒表达载体得到pSuper-miR-125a重组质粒;将重组质粒转染Hela细胞,miRNA定量PCR检测重组质粒表达miR-125a的效率和特异性.结果与结论:成功将miR-125a前体(Pre-miR-125a)片段克隆入真核表达质粒pSuper H1启动子下游,获得pSuper-miR-125a重组表达质粒,转染该质粒进入Hela细胞后能够在细胞内高效和特异的表达miR-125a,进一步证明 pSuper真核表达质粒适合miRNA的表达研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张涛	解放军成都军区总医院肿瘤诊治中心	3	5	1.0	2.0
2	李东	解放军成都军区总医院肿瘤诊治中心	1	1	1.0	1.0
3	李华	解放军成都军区总医院肿瘤诊治中心	1	1	1.0	1.0
4	高辉	解放军成都军区总医院肿瘤诊治中心	2	5	1.0	2.0