携带人血管内皮生长因子165慢病毒表达载体的构建与表达

• 作者: 易超 李海军 王喜艳 王海
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 人血管内皮生长因子165 慢病毒载体 BLR 3A 大鼠肝细胞 转染 基因治疗
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1927-1932
• 分类号: R318
• 字数: 5849字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.11.007

摘要

背景:已有研究证实血管内皮生长因子在正常肝脏肝部分切除后余肝的再生过程中发挥着重要的作用,但关于其对肝硬化肝脏是否也有相同作用国内外鲜有报道.目的:构建携带人血管内皮生长因子165 基因的慢病毒载体,体外转染BLR 3A 大鼠肝细胞并观察该细胞中人血管内皮生长因子165 基因的表达.方法:采用DNA 重组技术将人血管内皮生长因子165 基因克隆入pLenti6/V5-D-TOPO 慢病毒表达载体中,筛选出阳性克隆与慢病毒包装系统ViraPowerTM Packaging Mix 共转染293T 细胞产生病毒颗粒,通过实时定量-聚合酶链反应法测定病毒滴度;携带人血管内皮生长因子165 基因的慢病毒载体体外转染BLR 3A 大鼠肝细胞72 h 后,利用反转录-聚合酶链反应及Western blot 法检测细胞中人VEGF165 mRNA 及蛋白的表达.结果与结论:成功构建了表达人VEGF165 基因的慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO-VEGF165,测得病毒滴度为1.18×107 VP/mL.重组慢病毒载体转染BLR 3A 大鼠肝细胞72 h 后,荧光蛋白表达率超过80%,反转录-聚合酶链反应及Westernblot 法测得转染组人血管内皮生长因子165 mRNA 及血管内皮生长因子165 蛋白表达阳性.提示构建的携带人血管内皮生长因子165 的慢病毒载体可有效转染BLR 3A 大鼠肝细胞,并促使该细胞表达人血管内皮生长因子165 mRNA 及蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王喜艳	新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆胰腺肿瘤外科	115	322	8.0	14.0
2	李海军	新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆胰腺肿瘤外科	27	102	6.0	8.0
3	易超	新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆胰腺肿瘤外科	18	74	4.0	8.0
4	王海	新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆胰腺肿瘤外科	1	0	0.0	0.0