靶向血管内皮生长因子基因的微小RNA真核表达载体的构建

• 作者: 区应亮 孙建 熊建宁 简志祥
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮生长因子 微小RNA 肝癌 肝细胞 抑制 基因表达 组织工程
• 年，卷（期）: 2012,（15）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2737-2740
• 分类号: R318
• 字数: 4247字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.017

摘要

背景:有研究表明微小RNA 及潜在靶基因在肝癌中起重要作用,但具体机制仍不清楚.目的:构建靶向血管内皮生长因子基因微小RNA 真核表达载体,评估其转染人肝癌细胞株HepG2 后血管内皮生长因子基因的干扰效果.方法:根据血管内皮生长因子序列设计合成4 对微小RNA 不同干扰片段,克隆到pcDNA6.2-GW/EmGFP-微小RNA 真核表达载体上,测序分析鉴定插入序列的完整性;并将其转染至HepG-2 细胞株中.采用实时荧光定量聚合酶链式反应分析血管内皮生长因子微小RNA 干扰效果,蛋白印迹技术测定重组体对血管内皮生长因子基因蛋白表达情况.结果与结论:构建的4 组重组体插入片段的碱基序列完全正确,重组体能干扰肝癌细胞HepG2 细胞血管内皮因子基因的表达,4 组重组体基因的mRNA 的表达水平和蛋白表达水平与阴性对照组相比明显降低(P < 0.05),其中血管内皮生长因子微小RNA-3 表达水平最低,抑制率87%.结果证实,实验成功构建血管内皮生长因子微小RNA 表达载体,在体外能有效抑制HepG2 细胞血管内皮生长因子基因表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙建	广东省人民医院肝胆外科	22	75	5.0	7.0
2	简志祥	广东省人民医院肝胆外科	47	221	8.0	12.0
3	区应亮	广东省人民医院肝胆外科	15	60	4.0	7.0
4	熊建宁		1	2	1.0	1.0