大鼠髓核细胞原代培养及表型鉴定

• 作者: 姬振伟 张涛 范清宇 蔡承魁 裘秀春 贠喆 钱济先 马云雷
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 髓核细胞 原代培养 HIF-1α MMP2 Ⅱ型胶原
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 430-434
• 分类号: Q95-3|Q813|R68
• 语种: 中文

摘要

目的:探讨Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离培养髓核细胞及免疫细胞化学表型鉴定的可行性.方法:无菌务件下分离SD大鼠凝胶状髓核,采用Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离髓核细胞并连续培养,倒置相差显微镜下观察,随后进行免疫细胞化学染色检测不同代次髓核细胞HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2及蛋白聚糖的表达情况,并给予MTT法测定髓核细胞生长曲线.结果:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶分离培养原代髓核细胞需要12d左右贴壁,达95％融合需要34d,而传代髓核细胞贴壁速率明显增快至10h,且其倍增时间约为2.5d;免疫细胞化学显示髓核细胞均表达HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2和蛋白聚糖,且随着髓核细胞传代其HIF-1α、HIF-1p、Ⅰ型胶原及MMP2表达均增加,但Ⅱ型胶原表达降低,而蛋白聚糖表达无明显差异;MTr法显示随着髓核细胞传代其增殖有所减缓.结论:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶可成功分离髓核细胞,提高培养效率,且HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ、Ⅱ型胶原及MMP2可作为髓核细胞表型分子用于髓核细胞的鉴定.