脑胶质瘤组织中R132H突变型hIDH1基因双顺反子真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 伏林山 周岱 左剑玲 朱剑 王中 王秀云 许期年 陈旭仁
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 颅内肿瘤 胶质瘤 异柠檬酸脱氢酶1 双顺反子 质粒 基因突变
• 年，卷（期）: 2012,（26）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 10-13
• 分类号: R739.41
• 字数: 3217字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2012.26.006

摘要

[目的]以pcDNA3.1(+)为骨架,构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含R132H突变的人源异柠檬酸脱氢酶1基因(hIDHIR132H)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列的双顺反子真核表达载体.[方法]以内部核糖体进入位点(IRES)/EGFP片段为模板,扩增出IRES/EGFP片段,并在5′末端引入3×Flag标签；通过PCR介导的定点突变法,以pCMV-sports6-hIDH1为模板,扩增hIDH1R132H基因片段,并在3′末端引入3×Flag标签；通过PCR连接两种产物后经双酶切定向克隆入pcDNA3.1(+)骨架；转化大肠杆菌后挑取阳性克隆,提取质粒进行PCR检测及基因序列测定.[结果]PCR检测7个菌落中有6个阳性克隆,DNA测序发现引入了h1DH1基因.[结论]成功构建了双顺反子真核表达载体pcDNA3.1(+)-hIDH1 R132H/3 × Flag/IRES/EGFP,为研究人胶质瘤组织中R132H突变的作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许期年		32	318	7.0	17.0
2	周岱		171	1038	16.0	24.0
3	王中		231	1057	14.0	21.0
4	王秀云		24	62	4.0	7.0
5	左剑玲		18	54	4.0	7.0
6	伏林山		12	55	4.0	7.0
7	朱剑		5	12	3.0	3.0
11	陈旭仁		1	0	0.0	0.0