兔膜联蛋白A1基因短发夹RNA慢病毒载体构建与RNA干扰效率的鉴定

• 作者: 梁博伟 殷国前 潘新元 胡峰 赵劲民
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 膜联蛋白A1 短发夹RNA 慢病毒载体 RNA 干扰 成骨细胞
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1954-1958
• 分类号: R318
• 字数: 5887字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.11.013

摘要

背景:膜联蛋白A1 参与细胞凋亡的调控.目的:针对兔膜联蛋白A1 基因构建短发夹RNA 慢病毒载体,并检测其对成骨细胞的沉默效率.方法:针对兔膜联蛋白A1 基因设计RNA 干扰靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与BamHI 和EcoRI 双酶切后的pGLV/H1/GFP 载体连接成pGLV-shANXA1,PCR 筛选阳性克隆,测序鉴定.pGLV-shANXA1 和pGLV/helper-1、pGLV/helper-2、pGLV/helper-3 共转染293FT 细胞包装产生慢病毒颗粒LV-shANXA1,并测定其滴度,随后将LV-shANXA1感染兔成骨细胞.结果与结论:经PCR 和测序证实构建片段大小及DNA 序列与目标序列一致,shANXA1 片段完全正确插入慢病毒载体pGLV/H1/GFP 中.包装浓缩慢病毒颗粒LV-shANXA1 的滴度为3.8×108 TU/L.经嘌呤霉素筛选后,感染复数为50 时,LV-shANXA1 对成骨细胞感染效率为80%;感染复数为100 时,感染效率为95%.Real-time PCR 和Western blot 检测显示,LV-shANXA1-901 对膜联蛋白A1 基因的沉默效率最高,在感染复数为50 时,沉默效率可达71.2%.表明实验成功构建的兔膜联蛋白A1 基因短发夹RNA 慢病毒载体能够在细胞水平有效沉默靶基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵劲民	广西医科大学第一附属医院创伤手外科	221	1689	20.0	30.0
2	殷国前	广西医科大学第一附属医院整形外科	96	529	11.0	17.0
3	胡峰	广西医科大学第一附属医院创伤手外科	19	92	5.0	9.0
4	梁博伟	广西医科大学第一附属医院创伤手外科	10	79	4.0	8.0
5	潘新元	广西医科大学第一附属医院整形外科	8	53	4.0	7.0