Gateway非放射标记法构建小鼠破骨细胞前体细胞cDNA文库

• 作者: 张玉平 毛平 王彩霞 王顺清 许艳丽 谢健晋
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠 破骨细胞 cDNA质粒文库 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 215-219
• 分类号: R318
• 字数: 5488字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.02.005

摘要

背景:作者前期研究发现一个在破骨细胞形成中起关键作用的基因,其在细胞之间相互识别及膜融合中发挥关键作用.目的:采用Gateway的非放射标记技术构建小鼠破骨细胞早期形成细胞的cDNA基因文库,并检测文库质量.方法:采集C57BL/6小鼠长骨骨髓,收集贴壁的骨髓单核细胞,加入巨噬细胞集落刺激因子和RANKL诱导形成破骨细胞,在巨噬细胞开始融合至形成破骨细胞的不同阶段开始收集细胞,提取总RNA,用CloneMiner TM cDNA文库构建试剂盒,采用非放射标记方法构建小鼠破骨细胞全长cDNA文库.结果与结论:构建的小鼠骨髓巨噬细胞cDNA文库滴度为2.15×107 CFU/ mL,库容量为10.5×107 CFU,重组率为100%,重组子插入cDNA平均片段大小约为1.7 kb,范围为0.1~5.8 kb.表明非放射标记法构建同样可以构建小鼠骨髓巨噬细胞全长cDNA质粒文库,避免了放射性物质的接触,且文库质量良好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许艳丽	广州市第一人民医院血液科	39	315	9.0	17.0
2	毛平	广州市第一人民医院血液科	64	218	8.0	10.0
3	王顺清	广州市第一人民医院血液科	52	151	7.0	8.0
4	张玉平	广州市第一人民医院血液科	25	68	4.0	6.0
5	谢健晋	广州市第一人民医院血液科	17	50	3.0	6.0
6	王彩霞	广州市第一人民医院血液科	21	46	4.0	6.0