栀子高质量总RNA的提取

• 作者: 朱玉野 朱继孝 王晓云 罗光明
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 栀子 叶片 果实 总RNA cDNA 60S核糖体蛋白L18A基因
• 年，卷（期）: 2012,（27）
• 所属期刊栏目: 生物技术—研究报告
• 页码范围: 194-198
• 分类号: Q78
• 字数: 5276字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6850.2012.27.038

摘要

利用改进的高盐高pH值法和EASYspin植物RNA快速提取试剂盒,从富含次生代谢产物的栀子叶片和果实中提取总RNA.用紫外分光光度法和1％非变性琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量,0.7％非变性琼脂糖凝胶电泳检测反转录产物质量,利用RT-PCR反应检测反转录产物用于基因扩增的有效性.结果表明,高盐高pH值法提取的栀子果实总RNA,试剂盒法提取的栀子叶片总RNA产量均较高,28S和18S条带清晰,28S条带亮度是18S条带的2倍,且A260/A280在1.9～2.0；以提取的RNA为模板反转录的cDNA长度范围较广(250～5000 bp)；上述反转录获得的cDNA均能够成功用于60S核糖体蛋白L18A基因片段的扩增.综上所述,利用高盐高pH值法提取栀子果实总RNA、利用EASYspin植物RNA快速提取试剂盒提取栀子叶片总RNA,效果最好.本研究成功建立了从栀子果实和叶片中提取高质量总RNA的方法.