EVAGreen实时荧光定量PCR检测类志贺邻单胞菌的方法建立

• 作者: 叶倩 廖虹瑜 曹霞 杨晶艳 胡鹏威 裴晓方 陈智瑾
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 类志贺邻单胞菌 实时荧光定量PCR EVAGreen 23S rRNA 检测
• 年，卷（期）: 2012,（23）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 6234-6237
• 分类号: R115
• 语种: 中文

摘要

目的 建立实时荧光定量PCR快速检测类志贺邻单胞菌的方法.方法 以类志贺邻单胞菌23S rRNA基因为目标设计引物,使用EVAGreen染料建立实时荧光定量PCR方法并优化反应条件,构建重组质粒作为标准DNA,建立标准曲线；评估该方法的灵敏度、重复性和特异性,并将所建方法用于粪便模拟样品的检测,与常规培养法比较.结果 在反应体系为10μl,模板为1μl的条件下,该方法可测的最低拷贝数为2.18×101拷贝/体系；重组质粒标准建立的标准曲线具有较大的线性范围(108～102 copies/μl)；批间差异小于5％,批内差异小于3％；特异性试验中类志贺邻单胞菌检测结果均为阳性,其他常见肠道致病菌、常见弧菌以及常见正常肠道菌均为阴性；粪便模拟样品前增菌处理后检测灵敏度为25 cfu/10 ml增菌液,检测结果和传统培养法相符.结论 成功建立EVAGreen实时荧光定量PCR方法,该方法的建立为类志贺邻单胞菌的检测提供了一种简便、快捷的途径,并可对样品中类志贺邻单胞菌进行快速定量检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈智瑾	四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室	4	22	3.0	4.0
2	曹霞	四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室	13	56	5.0	6.0
3	杨晶艳	四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室	4	30	4.0	4.0
4	叶倩	四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室	14	52	5.0	7.0
5	廖虹瑜	四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室	3	25	3.0	3.0
6	胡鹏威	四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室	4	25	3.0	4.0