番茄黄化曲叶病毒CP基因的原核表达载体构建选择

• 作者: 乔宁 刘永光 唐玉海 李美芹 王兴翠 魏家鹏
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 番茄黄化曲叶病毒 外壳蛋白基因 pET-32a pET-28a 诱导表达
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 3901-3902,3905
• 分类号: S436.412.1+1
• 字数: 2276字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2012.07.025

摘要

[目的]筛选出目的蛋白能够高效表达的重组质粒.[方法]利用原核表达载体pET-32a(+)和pET-28a(+)成功构建了番茄黄化曲叶病毒(Tomato Yellow Leaf Curl Virus,TYLCV)外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因的重组质粒p32a-CP和p28a-CP,并通过PCR和双酶切鉴定了序列连接的正确性；再分别将2个载体转化至BL21(DE3)中,采用不同浓度的IPTG对其进行诱导表达,并进行SDS-PAGE电泳检测.[结果]测序结果显示TYLCV-CP基因已定向插入p32a-CP和p28a-CP中；SDS-PAGE电泳结果显示分子量约为50 kD的目的蛋白在重组载体p32a-CP中得到了高效表达,而在重组载体p28a-CP中未表达.[结论]为下一步的抗体制备及TYLCV的免疫学检测奠定了基础.