半滑舌鳎生长因子midkine的定点改造及原核表达

• 作者: 于海洋 刘志鹏 刘旭东 张全启 李春梅 王亚楠 穆琳琳
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 半滑舌鳎 midkine 原核表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 330-336
• 分类号: Q781|S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2013.37969

摘要

为进一步研究半滑舌鳎midkine(MK)成熟肽活性与功能,对半滑舌鳎生长因子MK成熟肽进行定点改造及原核表达.根据大肠杆菌偏爱密码子的特点,实验利用SOEing PCR法对半滑舌鳎MK成熟肽进行定点突变.将改造后的半滑舌鳎成熟肽MK克隆到载体质粒pET32a(+),构建原核表达载体pET32a(+)-MK,并转化至大肠杆菌BL21(DE3) pLysS菌株中.SDS-PAGE结果显示,与对照组相比,经IPTG诱导表达后半滑舌鳎重组蛋白MK存在于大肠杆菌上清液中,产物相对分子质量约为33 ku.研究表明,本实验对半滑舌鳎生长因子midkine成功进行了定点改造,原核表达质粒成功构建并在大肠杆菌中高效表达,且主要以可溶形式存在.