一种简单高效的酵母单菌落 PCR 方法

• 作者: 房志家 赵敏 陈婷 陈忠翔 黄志伟
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 酵母 菌落 PCR 重组克隆 筛选
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 225-229
• 分类号: Q78
• 字数: 3663字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.02.019

摘要

目的:为快速简便地挑选出酿酒酵母重组克隆,探索建立一种经济、直接、高效的酵母单菌落 PCR 方法.方法:以 Leu2MX6基同重组或重组质粒转化得到的酵母突变菌为材料,分别采用传统的提取基组或质粒的方法、煮沸法及化学试剂处理法等制备 PCR 模板进行重组克隆鉴定,并对6种 PCR 模板制备方法的效果进行比较与分析;对加热提取法进行优化并进行重组子的提取和验证.结果与结论:直接以1 mm2单克隆菌株95℃处理5 min 后的酵母菌落水悬浮液为模板进行单菌落 PCR,是一种简单高效的酵母重组克隆鉴定方法.该方法能弥补传统方法的不足,且简便快速、结果稳定,可作为筛选和鉴定阳性克隆的有效手段.同时,这种单菌落 PCR 法也可应用重组毕赤酵母的阳性克隆筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵敏	东华大学化学化工与生物工程学院	20	180	7.0	13.0
2	陈婷	东华大学化学化工与生物工程学院	41	135	7.0	10.0
3	黄志伟	东华大学化学化工与生物工程学院	13	42	4.0	6.0
4	房志家	东华大学化学化工与生物工程学院	7	41	4.0	6.0
5	陈忠翔	东华大学化学化工与生物工程学院	2	16	2.0	2.0