基于高分辨熔解分析的cry1I类基因的克隆、表达及活性分析

• 作者: 孙冰 宋福平 张春鸽 张杰 束长龙 赵灿 高继国
• 来源期刊: 中国生物防治学报
• 学科: 农学
• 关键词: 苏云金芽胞杆菌 高分辨熔解分析 cry1I 克隆 杀虫活性
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 页码范围: 68-73
• 页数: 6页
• 分类号: S476.11|Q786
• 字数: 3746字
• 语种: 中文

摘要

本研究将高分辨熔解分析（high resolution melting assay，HRMA）的方法应用于cry1I类基因的分型。根据已报道的cry1I类基因的保守区设计一对扩增片段为131 bp的通用鉴定引物，利用高分辨熔点仪对产物的熔解曲线进行分析。利用此方法对本实验室保存的标准菌株HD-12进行了cry1I类基因的鉴定，克隆到2个新型的cry1Ib和cry1Id基因，被Bt国际命名委员会分别正式命名为cry1Ib11和cry1Id2。这两种基因在E. coli Rosetta菌株中能正常表达81 kDa的蛋白。Cry1Ib11和Cry1Id2蛋白对小菜蛾Plutella xylostella 二龄幼虫和亚洲玉米螟 Ostrinia furnacalis 初孵幼虫具有显著的杀虫活性，LC50分别为6.13μg·mL?1和6.10μg·mL?1及11.18μg·mL?1和1.43μg·mL?1。但对甜菜夜蛾Spodoptera exigua及鞘翅目的大猿叶甲Colaphellus bowringi均没有明显毒杀作用。高分辨溶解分析法为新型cry基因的快速、准确鉴定提供了有效的工具。