桃果实PpCuZnSOD基因的原核表达、纯化与鉴定

• 作者: 丛丽君 吴军帅 李培环 段艳欣 王滨 董晓颖
• 来源期刊: 果树学报
• 学科: 农学
• 关键词: 桃 PpCuZnSOD 原核表达 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 种质资源·遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 185-190
• 页数: 6页
• 分类号: S662.1
• 语种: 中文

摘要

[目的]为了实现桃铜锌超氧化物岐化酶在大肠杆菌中的高效表达,获得表达稳定、蛋白纯度高、活性强的工程菌,[方法]将前期获得的PpCuZnSOD基因(GenBank登录号:JX217743)重组到原核表达载体pET-32a(+)中,并转化到Escherichia coli BL21 (DE3)宿主菌,经IPTG进行诱导表达.对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测,镍柱亲和层析纯化,并采用Brad Ford方法测定融合蛋白浓度,黄嘌呤氧化法分析其酶活.[结果]成功的构建了原核表达载体pET-32a(+)-PpCuZnSOD,并获得分子质量约为35 kDa的诱导表达产物,纯化后融合蛋白浓度为183.7 mg·L-1,活性为5.23×103 U· mg-1.[结论]成功构建了桃pET-32a(+)-PpCuZnSOD原核表达载体,表达量高、稳定性强,重组表达产物具有较高CuZnSOD酶活性,为桃CuZnSOD酶的进一步研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段艳欣		29	153	6.0	12.0
2	李培环		47	472	13.0	20.0
3	董晓颖		26	297	9.0	17.0
4	丛丽君		2	1	1.0	1.0
5	王滨		3	26	1.0	3.0
6	吴军帅		2	1	1.0	1.0