米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40中烯酮/烯酯还原酶的异源表达及性质分析

• 作者: 任杰 冯进辉 吴洽庆 张同存 张海灵 朱敦明 陈曦 高秀珍
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: 不对称还原 烯酮/烯酯还原酶 古老黄色酶
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 41-46
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|Q81
• 字数: 4535字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2013.01.008

摘要

以米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40基因组DNA为模版,通过PCR扩增其烯酮烯酯还原酶(AspER)基因(asper)后连接到表达载体pET32a(+)上,在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶形式表达.通过Ni-NTA亲和色谱层析纯化后,蛋白纯度提高1.9倍,回收率为60.62％.根据分子筛凝胶层析结果推算,AspER以二聚体形式存在.性质分析表明此酶为依赖于NADPH的氧化还原酶,最适pH为7.0 ～8.0,最适温度为40℃.对2-环己烯酮Km和kcat值分别为(2.45±0.36) mmol/L和(4.4±0.4)×103 s-1.底物谱分析发现AspER对马来酰亚胺及其衍生物有较高的活性,其中对2-甲基马来酰亚胺的转化率和e.e.值均高于99％.