脂质体介导缺氧诱导因子-1α特异性小干扰RNA重组质粒对小鼠视网膜新生血管的抑制作用

• 作者: 夏晓波 宋伟涛 熊宇 蒋剑
• 来源期刊: 中华眼底病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 视网膜新生血管化/药物疗法 缺氧诱导因子1,α亚基 脂质体 基因转移技术 动物实验
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 290-295
• 页数: 6页
• 分类号: R774
• 字数: 6763字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2013.03.014

摘要

目的 观察脂质体LipofectamineTM 2000(LF2000)介导pSUPER为载体的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)特异性小干扰RNA重组质粒(pSUPERsiHIFα)对小鼠视网膜新生血管的抑制作用.方法 构建重组质粒pSUPERsiHIF-1α.将48只7日龄C57BL/6J小鼠分为正常组、空白对照组、空载体组和基因治疗组,每组12只.正常组小鼠在正常空气中饲养.空白对照组、空载体组和基因治疗组建立氧诱导的视网膜新生血管模型.后空白对照组小鼠不再作任何处理.于出舱前1d,空载体组小鼠玻璃体腔注射pSUPER和LF2000脂质体混合物1μl,基因治疗组小鼠玻璃体腔注射重组质粒pSUPERsiHIF1α和LF2000脂质体混合物1μl.采用荧光造影视网膜铺片观察各组小鼠视网膜血管形态变化；作病理切片,光学显微镜下计数各组突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数；免疫组织化学染色法检测各组小鼠视网膜中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达；逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测各组小鼠视网膜中HIF-1αmRNA的表达.结果 视网膜铺片荧光显微镜观察显示,正常组小鼠整个视网膜血管分布呈均匀网状；空白对照组、空载体组小鼠视网膜中周部可见大片无灌注区及新生血管丛,伴荧光渗漏；基因治疗组无灌注区及新生血管丛空白对照组、空载体组明显减少,视网膜血管网状结构基本正常.光学显微镜观察发现,空白对照组、空载体组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数较正常组明显增多,差异有统计学意义(F=5850.016,P＜0.05)；基因治疗组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数较空白对照组明显下降,差异有统计学意义(F=3012.469,P＜0.05).免疫组织化学染色结果显示,HIF-1α蛋白阳性表达主要位于细胞核中,VEGF蛋白阳性表达主要位于细胞浆中.正常组小鼠视网膜中HIF-1α蛋白表达均呈阴性,VEGF蛋白表达呈弱阳性；空白对照组、空载体组小鼠HIF-1α、VEGF蛋白表达均呈阳性；基因治疗组小鼠视网膜中HIF-1α、VEGF蛋白表达均呈弱阳性.RT-PCR检测结果显示,空白对照组、空载体组较正常组小鼠视网膜中HIF-1α mRNA表达上调,差异有统计学意义(F=3102.326,P＜0.05).基因治疗组小鼠视网膜中HIF-1α mRNA表达较空白对照组下调,差异也有统计学意义(F=3336.425,P＜0.05).结论 脂质体介导重组质粒pSUPERsiHIF-1α转染视网膜可有效抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管的形成.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏晓波	中南大学湘雅医院眼科	85	304	9.0	12.0
2	熊宇	南昌大学第二附属医院眼科	17	41	3.0	6.0
3	宋伟涛	中南大学湘雅医院眼科	12	52	3.0	7.0
4	蒋剑	中南大学湘雅医院眼科	22	48	4.0	5.0