线粒体内膜蛋白质mitofilin干涉慢病毒的构建及应用

• 作者: 于淼 王易龙 王珊 詹轶群
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 线粒体内膜蛋白 慢病毒 凋亡 线粒体 ATP合酶
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 685-691
• 页数: 7页
• 分类号: Q244|R373
• 字数: 6346字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.09.012

摘要

目的 构建线粒体内膜蛋白质mitofilin的慢病毒干涉载体,初步研究mitofilin在体内体外的生物学功能.方法 将靶向人mitofilin基因的短发夹RNA(shRNA)序列克隆到慢病毒核心质粒pSicoR中,瞬时转染HEK293T细胞筛选出有效的干涉片段,并进行慢病毒的包装.病毒感染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,Western印迹检测mitofilin蛋白的干涉效果.15 Gy γ射线照射刺激病毒感染的HeLa细胞,流式细胞术检测细胞凋亡.利用尾静脉大容量快速注射法将慢病毒注射入C57BL/6J小鼠体内,6.5 Gy γ射线照射刺激,蓝色温和电泳联合胶内酶活性染色分析,检测呼吸链复合体Ⅴ活性变化.结果 与结论成功构建具有mitofilin干涉效果的慢病毒干涉载体并获得了稳定干涉mitofilin的HeLa细胞株.构建的慢病毒能有效下调HeLa细胞和小鼠肝脏细胞mitofilin蛋白的表达.干涉mitofilin表达可增加γ射线诱导的细胞凋亡,降低γ射线刺激下小鼠肝细胞线粒体呼吸链复合体Ⅴ的活性.所构建的干涉慢病毒能够广泛应用于mitofilin在体内和体外的功能研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	詹轶群	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	36	155	5.0	11.0
2	于淼	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	11	21	2.0	4.0
3	王珊		8	40	3.0	6.0
4	王易龙	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	1	2	1.0	1.0