大质粒DNA疫苗pSVK-CAVA高稳定性宿主菌的筛选与鉴定

• 作者: 于继云 刘姣 吴昊 张巍 徐元基 朱晓明 殷小涛 王宇 王琳 田仁礼 阎瑾琦
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 宿主菌 DNA疫苗 高稳定性 XL-10 Gold
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 48-52
• 页数: 5页
• 分类号: Q93-33
• 字数: 3779字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2013.01.014

摘要

目的:从多种大肠杆菌感受态细胞中筛选出适合该研究大分子质粒DNA疫苗的宿主菌,鉴定其达到中试要求.方法:将疫苗质粒pSVK-CAVA(14.7kb)转化4种大肠杆菌化学感受态细胞并提取质粒,通过琼脂糖凝胶电泳实验检测质粒的形态结构.对基因工程菌进行生化检测,并通过连续传代法和酶切鉴定进行稳定性检测,同时将质粒DNA瞬时转染至293T细胞中检测质粒表达能力.选取质粒含量最高和稳定性最好的宿主菌作为原始种子分装冻存,将原始种子库扩大培养,逐级建立好主种子库和工作种子库即三级种子库.通过摇瓶培养实验在4种常用基础培养基中挑选出最适合质粒生产的培养基.结果:确定了XL-10 Gold作为质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的宿主菌,基因工程菌传代稳定性和结构稳定性良好,质粒能在293T细胞中体外表达.筛选出TB培养基为基础培养基,质粒容积产量达到9.9mg/L,比LB培养基提高了接近1倍.结论:该研究筛选出大肠杆菌XL-10 Gold作为质粒DNA疫苗的宿主菌,解决了大质粒在常用宿主菌中不稳定的难题,并对基础培养基讲行了初步优化.