海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin的原核表达及其活性测定

• 作者: 吴国艺 张敏仪 徐明芳 沈巍 董濠鋆 陈小佳 麦迪思 黎卓键
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: Harobin SUMO 原核表达 蛋白纯化 纤维蛋白原 降解
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 198-202
• 页数: 5页
• 分类号: Q55
• 语种: 中文

摘要

本文利用原核系统表达海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin,并纯化和鉴定其活性.首先PCR法从模板分别扩增SUMO以及Harobin基因,再重叠PCR方法获得SUMO-Harobin融合基因,经NdeI、BamHI双酶切后,连入pET3C质粒,构建pET3 C-SUMO/Harobin重组质粒.重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导菌体表达,收集菌体分析发现大部分目的蛋白为包涵体.将获得的包涵体经尿素变性,用Ni-NTA亲和层析后,梯度透析复性融合蛋白.复性好的蛋白用Benzamidin Sepharose亲和层析纯化,得到高纯度的融合蛋白.进一步采用降解纤维蛋白原法测定融合蛋白活性.结果成功构建了pET3C-SUMO/Harobin重组载体,融合蛋白Harobin在原核系统中是以包涵体的形式存在.融合蛋白经过变性复性,并结合两步纯化法获得了90％纯度的融合蛋白；经过测定纤维蛋白原降解能力,显示融合蛋白具有降解纤维蛋白原的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈小佳		31	287	9.0	16.0
2	徐明芳		49	551	14.0	20.0
3	董濠鋆		1	0	0.0	0.0
4	张敏仪		1	0	0.0	0.0
5	黎卓键		2	0	0.0	0.0
6	吴国艺		1	0	0.0	0.0
7	麦迪思		1	0	0.0	0.0
8	沈巍		1	0	0.0	0.0