重组人促性腺激素-铜绿假单胞菌外毒素A蛋白的可溶性表达、纯化和对肿瘤细胞的抑制活性

• 作者: 周红姿 李纪顺 杨合同 赵晓燕 郭凯 陈凯 陈泉
• 来源期刊: 山东科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 人促黄体激素释放激素 绿脓杆菌外毒素A 可溶性表达 表达菌株
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 41-47
• 页数: 7页
• 分类号: Q753
• 字数: 4826字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3976/j.issn.1002-4026.2013.02.008

摘要

以人促性腺激素-铜绿假单胞菌外毒素A衍生物(GnRH-PE39KDEL)为研究对象,根据大肠杆菌密码子偏好性优化,通过基因合成的方法获得重组蛋白核酸序列,连接至pET-24b载体中,并转化入大肠杆菌BL21 (DE3)及BL21(DE3)plyS中进行诱导表达.结果显示,在含有2 mg/mL葡萄糖的LB培养基中37℃培养至OD600约为0.6h,加入0.2 mmol/L IPTG在30℃诱导2h后,重组蛋白可以实现可溶性高表达.工程菌经超声波破碎、高速离心后,经镍柱纯化和脱盐后得到重组蛋白,蛋白纯度达到95％以上,蛋白最终得率在2.6 mg/g菌体.重组蛋白经IC50检测,可以较好地抑制肿瘤细胞株的生长.