表达miR-192的重组腺病毒的构建及其在肝细胞中的表达分析

• 作者: 于虹 代晓朋 周育森 张伟 张红飞 李军锋 赵光宇 郭彦
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 基因 肝癌细胞
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 页码范围: 8-12
• 分类号: Q78|R735.7
• 字数: 4146字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.01.002

摘要

目的:构建表达miR-192的重组腺病毒,感染HepG2细胞建立miR-192高表达的细胞模型,以研究miR-192在肝细胞中的功能.方法:将miR-192前体基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack,构建miR-192穿梭载体pAdTrack-miR-192,经线性化和同源重组,构建重组腺病毒载体pAd-miR-192;线性化后,在QBI-293A细胞中进行病毒包装;用包装成功的重组腺病毒感染HepG2细胞,72 h后收集细胞,提取总RNA,逆转录后进行定量PCR,检测miR-192和潜在靶分子视网膜母细胞瘤基因1(RB1)mRNA的变化.结果:获得670 bp的miR-192前体基因,经过穿梭载体后重组构建表达miR-192的腺病毒载体pAd-miR-192;将pAd-miR-192转染QBI-293A细胞,第8 d细胞病变及荧光的表达结果表明重组腺病毒成功包装;感染HepG2细胞后,定量PCR检测表明miR-192的表达较对照增加了835.87倍,同时检测到细胞中RB1 mRNA的表达显著降低.结论:构建了高效表达miR-192的腺病毒,建立了miR-192高表达的肝细胞模型,证明在肝细胞中抑制的RB1是miR-192靶分子,为后续miR-192在肝细胞中功能的研究奠定了基础.