甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用研究

• 作者: 孙梓健 宋明 汤青林 王小佳 王志敏 许俊强
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 结球甘蓝 CaM12 S位点受体激酶(SRK7)基因 原核表达 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 蔬菜
• 页码范围: 2429-2440
• 分类号: S635.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0513-353X.2013.12.010

摘要

为研究甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用的分子机理及其可能相互作用的区域,从自交不亲和甘蓝材料‘E1’中分别克隆得到CaM12基因450 bp及S位点受体激酶(SRK7)基因全长序列2 118 bp,并亚克隆得到SRK胞外域(eSRK)和胞内激酶域(iSRK),构建原核表达载体pGEX-CaM 12、pCold-eSRK和pCold-iSRK,转化E coli BL21 (DE3)进行原核表达,表达产物纯化后进行体外相互作用,结果表明CaM12能够与SRK7进行相互作用,但作用区域是iSRK7而不是eSRK7.为进一步验证其相互作用,本研究利用酵母双杂交系统,构建pGBKT7-CaM 12、pGADT7-eSRK7、pGADT7-iSRK7和pGADT7-SRK7酵母表达载体,转化相应酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后未出现自激活和毒性现象,相互作用结果与原核表达检测一致.同时将CaM12的3个EF-hands结构域突变体CaM 12-2-、CaM 12-23-和CaM12-234-与iSRK7分别构建酵母表达载体pGADT7-CAM12-2-、pGADT7-CAM 12-23-、pGADT7-CAM12-234-,检测其相互作用.结果表明CaM 12 EF-hands突变体CaM 12-2-、CaM 12-23-和CaM12-234-在酵母双杂交系统中均不能与iSRK7片段发生相互作用,说明CaM12的EF-hands结构域突变后失去结合Ca2+能力而不能与iSRK7相互作用.该研究可为自交不亲和机理提供新的参考依据.