农杆菌子房注射法对金钗石斛的活体转化研究

• 作者: 刘其府 吴坤林 张建霞 曾宋君 段俊 董会 陈之林
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 金钗石斛 农杆菌子房注射法 GUS组织化学染色 活体转化 PCR检测
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 378-382
• 页数: 5页
• 分类号: S682
• 字数: 3749字
• 语种: 中文

摘要

对金钗石斛Dendrobium nobile进行人工自花授粉,在授粉之后10、20、30、40、45、50和60d分别将工程化根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens EHA105(pCAMBIA1301)直接注射入子房内部.150 d后,金钗石斛蒴果成熟,摘取果实,进行种子β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色、无菌播种、潮霉素筛选以及PCR检测试验.结果表明:子房注射对果实发育具有较大影响,在授粉后10 ～30 d进行子房注射后,果实脱落；在授粉后45 d进行子房注射,成熟果实注射部位的种子GUS染色率最高,可达18％；无菌播种之后,经潮霉素筛选,获得11株幼苗,每株植株均表现出GUS染色反应；随机挑选4株幼苗进行PCR检测,发现均能扩增出预期条带,说明外源基因已经整合到植株基因组内.农杆菌子房注射法在兰科植物转基因的成功应用,可以为兰科植物育种提供一种简单高效的方法.