艰难梭菌毒素B受体结合区的表达

• 作者: 刘元元 刘文恩 彭婉婵 李艳华 简子娟 谷秀梅 陈丽华 陈伟
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 梭菌,难辨 细菌蛋白质类 细菌毒素类 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 324-328
• 页数: 5页
• 字数: 4312字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2013.04.008

摘要

目的 通过对艰难梭菌毒素B受体结合区进行基因克隆、表达,获得目的蛋白,为建立快速检测艰难梭菌的方法奠定基础.方法 复苏艰难梭菌,提取基因组DNA,PCR扩增目的基因,回收后与pGEM-T连接进行TA克隆,通过PCR、酶切及基因测序鉴定pGEM-T-CDB3.酶切pGEM-T-CDB3和pGEX-4T-1,回收CDB3和pGEX-4T-1,连接后转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建重组质粒pGEX-4T-1-CDB3,然后应用IPTG诱导目的蛋白表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定目的蛋白大小和特异性.结果 经PCR扩增获得了艰难梭菌毒素B受体结合区(CDB3)基因全长片段1851 bp.克隆质粒pGEM-T与CDB3重组获得了质粒pGEM-T-CDB3,片段长为4800 bp左右.构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-CDB3,目的蛋白经诱导后获得表达.结论 原核蛋白表达载体pGEX-4T-1-CDB3构建成功,并大量表达出目的蛋白,将对艰难梭菌毒素B的快速检测和疫苗的研制奠定良好基础.(中华检验医学杂志,2013,36:324-328)

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘文恩	中南大学湘雅医院检验科	181	1758	20.0	33.0
2	陈伟	中南大学湘雅医院检验科	149	828	15.0	20.0
3	刘元元	中南大学湘雅医院检验科	7	69	4.0	7.0
4	简子娟	中南大学湘雅医院检验科	29	237	9.0	13.0
5	彭婉婵	中南大学湘雅医院检验科	18	126	7.0	11.0
6	谷秀梅	中南大学湘雅医院检验科	21	183	9.0	13.0
7	李艳华	中南大学湘雅医院检验科	32	200	8.0	12.0
8	陈丽华	中南大学湘雅医院检验科	36	141	7.0	10.0