人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定

• 作者: 伊瑶 刘冰 周为民 常慧 毕胜利 王慧娟 赵国霞 赵敏 高基民
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: HCoV-NL63 受体结合区蛋白 重组蛋白 表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 106-111
• 页数: 6页
• 分类号: R373.1
• 语种: 中文

摘要

人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用.本研究在E.coli系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定.首先密码子优化设计合成了HCoV-NL63的RBD大片段(RL:232-684aa)与小片段(RS:476-616aa)的编码基因,并将其克隆进硫氧还蛋白表达载体pM48,构建了人冠状病毒NL63的受体结合区蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段与硫氧还蛋白的融合表达质粒；转化E.coli BL21pLys S,利用IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析对蛋白进行纯化,并以表达HCoV-NL63 RL与RS蛋白的重组痘苗病毒免疫小鼠血清对重组蛋白进行免疫印迹鉴定.结果表明在37℃,0.8mM IPTG诱导4h时,蛋白表达量达到最高,融合蛋白主要以包涵体形式表达,纯化后纯度可达95％以上.Western blot显示,两个融合蛋白均与痘苗病毒(天坛株)表达的HCoV-NL63 RL与RS蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应.本研究首次在国内用原核系统表达纯化并鉴定了人冠状病毒NL63受体结合区大小蛋白(RL和RS),为人冠状病毒NL63感染的免疫学检测与疫苗研究提供了基础.