少白细胞血小板miRNA提取方法*

• 作者: 万沁 刘飞 吴剑波 罗茂 马卫中
• 来源期刊: 泸州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: miRNA 少白细胞血小板 MACS 加尾及引物延伸RT-PCR
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 117-120
• 分类号: R34
• 字数: 3151字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立常规梯度离心结合MACS磁珠分选纯化和小分子RNA分离试剂盒简便快速提取血小板miRNA的方法.方法:利用常规梯度离心获取血小板后,结合MACS磁珠分选和小分子RNA分离试剂盒提取少白细胞血小板(LDP)小分子RNA;经血小板计数、CD45和GPIIb mRNA marker PCR扩增检测,判定纯化效果;通过小分子RNA浓度、纯度及毛细管电泳完整性检测,以及内参U6和血小板miR-449b加尾及引物延伸RT-PCR后PCR扩增结果验证构建血小板miRNA的cDNA模板真实性.结果:提取小分子RNA纯度较高,有效去除白细胞污染,虽然含量较少,但内参U6和血小板miR-449b真实性验证结果提示,构建血小板miRNA的cDNA模板质量较高.结论:常规梯度离心结合MACS磁珠分选纯化和小分子RNA分离试剂盒,可有效去除白细胞污染,保证小分子RNA完整性,从而提取高质量血小板miRNA的cDNA模板,可用于后续血小板miRNA试验研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万沁	泸州医学院附属医院内分泌科	56	179	6.0	10.0
2	罗茂	泸州医学院药物与功能性食品研究中心	13	48	4.0	6.0
3	刘飞	泸州医学院附属医院内分泌科	7	5	1.0	2.0
4	马卫中		1	0	0.0	0.0
5	吴剑波	泸州医学院药物与功能性食品研究中心	8	13	2.0	3.0