穿膜肽KGF-2的构建及其对HaCaT增殖作用的影响

• 作者: 任哲 刘秋英 彭鑫磊 王一飞 舒辉萍 荣靖 陈海佳 马岩岩
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: KGF-2 穿膜肽 克隆 原核表达 纯化 HaCaT细胞株
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 29-33
• 页数: 5页
• 分类号: Q786|Q811.3
• 字数: 3716字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2013.01.009

摘要

目的:构建穿膜肽KGF-2(TAT-KGF-2),研究其对人角质形成细胞HaCaT的增殖作用.方法:采用普通PCR技术和特殊引物从人胚胎肺成纤维细胞cDNA中扩增出目的基因TAT-KGF-2,并将其插入pET-28a(+)载体中构建pET28a-TAT-KGF-2重组质粒；将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白TAT-KGF-2;通过Ni-NTA柱纯化获得目标重组蛋白并利用Western blot进行鉴定；MTT法研究TAT-KGF-2对HaCa的增殖作用.结果:成功构建pET28a-TAT-KGF-2重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的人KGF-2基因序列同源性达到100％；获得穿膜肽KGF-2蛋白,分子量约为19 kDa,纯度达到95％以上；TAT-KGF-2对HaCaT在12.5 ng/ml时具有增殖作用,并呈浓度依赖性,而且与不具有穿膜功能的KGF-2相比有更强的增殖效果.结论:成功纯化出TAT-KGF-2蛋白,并验证其对HaCaT具有增殖作用,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础.