延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因敲除大鼠胚胎干细胞株的建立★

• 作者: 刘韬 叶真龙 王艳 金华君 钱其军
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 胚胎干细胞 基因敲除 同源重组 Fah基因 大鼠 干细胞图片文章
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 页码范围: 50-55
• 分类号: R394.2
• 字数: 5062字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.01.008

摘要

背景:小鼠肝损伤模型已被广泛应用,大鼠肝损伤模型能在发病机制,肝移植环境等方面更好地模拟人,建立大鼠延胡索酰乙酰乙酸水解酶(fuarylacetoacetat hydrolase,Fah)基因敲除的胚胎干细胞株是大鼠肝损伤模型建立的重点和难点.目的:建立Fah基因缺失的大鼠胚胎干细胞株.方法:根据 Genbank 检索出的大鼠 Fah 基因序列构建带有正负双向筛选系统的 Fah 基因敲除载体pKO-Fah,并进行大鼠胚胎干细胞制备与培养,通过电穿孔转染将线性化质粒转入大鼠胚胎干细胞中,用嘌呤霉素和增强型绿色荧光进行克隆的筛选,再对筛选出来的阳性克隆进行PCR验证.结果与结论:电穿孔转染后观察到绿荧光胚胎干细胞克隆,经过3轮嘌呤霉素药物筛选后约有90%的胚胎干细胞克隆表达绿荧光,成功挑取到2个稳定表达绿荧光的胚胎干细胞克隆,重组胚胎干细胞-Fah,通过PCR鉴定为正确同源重组的阳性克隆.提示大鼠胚胎干细胞稳定建系后,能通过传统的同源重组方法来建立基因敲除胚胎干细胞,并为后期基因敲除动物的建立奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱其军	浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所	38	56	5.0	6.0
2	王艳	解放军第二军医大学东方肝胆医院病毒基因治疗实验室	58	144	8.0	11.0
3	叶真龙	浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所	3	5	1.0	2.0
4	金华君	解放军第二军医大学东方肝胆医院病毒基因治疗实验室	2	2	1.0	1.0
5	刘韬	解放军第二军医大学东方肝胆医院病毒基因治疗实验室	1	1	1.0	1.0