慢病毒介导双shRNA靶向于HIV的抑制作用研究

• 作者: 孙晓娜 曾毅 杨怡姝 滕智平 郝彦哲 金孝华 马晶
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: HIV 基因治疗 RNA干扰 shRNA
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 126-131
• 页数: 6页
• 分类号: R512.91
• 语种: 中文

摘要

RNA干扰可以有效地抑制特定基因的表达,在HIV基因治疗中成为一种重要的方法.为了防止病毒逃逸株的出现,本研究分别构建了靶向于HIV-1调控蛋白基因vpr和tat的shRNA重组慢病毒载体以及含有这两种shRNA的双表达重组慢病毒载体,分别由U6和H1两种启动子启动,通过与靶向基因tat和vpr表达质粒在293T细胞中进行共转染,采用荧光定量PCR方法测定细胞内靶向基因的表达丰度,结果显示双表达shRNA的重组慢病毒载体对vpr和tat的表达抑制率分别可以达到89.20％和62.00％.与pNL4-3病毒包装质粒共转染,P24ELISA显示plvx-vpr-tat shRNA对病毒包装产量的抑制率可以达到99.05％,比单个shRNA的抑制率都要强,HIV-1 NL4-3体外对MT4细胞攻毒实验表明双shRNA重组慢病毒载体具有很强的抑制病毒复制的能力.