茶树二氢黄酮醇4-还原酶基因的克隆、表达及功能分析

• 作者: 刘亚军 夏涛 李伟伟 杨琴 王云生 胡晓婧 蒋晓岚 许玉娇 高丽萍*
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 二氢黄酮醇4-还原酶 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 193-201
• 分类号: S571.1|Q946.5
• 字数: 4880字
• 语种: 中文

摘要

茶树二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase, DFR)是儿茶素合成途径中的关键酶.本研究采用 RT-PCR 技术,获得了茶树二氢黄酮醇4-还原酶基因(CsDFR)的开放阅读框,它编码含347个氨基酸的蛋白质,推测分子量为38.69 kD,等电点为6.02.成功地将该基因重组到表达载体 SUMO 上,并在大肠杆菌 BL21中进行原核表达;优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG 浓度;纯化出目的蛋白.利用 HPLC-MS 方法对重组蛋白进行了体外酶活检测,结果表明目的蛋白具有 DFR 酶活性,可催化 DHQ 和 DHM 的还原反应.