大鼠DAF蛋白真核表达载体的构建及生物活性鉴定

• 作者: 张朋 张立 王巍
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 毕赤酵母 真核表达 pPIC9K 促衰变因子
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 333-336
• 语种: 中文

摘要

目的 构建大鼠促衰变因子(DAF)的酵母真核表达载体,诱导其表达并对生物学特性进行鉴定.方法 采用RT-PCR技术从大鼠肝脏组织中扩增出DAF基因并克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K质粒中.经酶切鉴定后,将pPIC9K-DAF转化至毕赤酵母菌GS115,通过G418-YPD平板筛选高拷贝转化子.转化子经甲醇诱导表达后,对表达的DAF蛋白进行SDS-PAGE及Western blot鉴定并检测重组蛋白的生物活性.结果 成功克隆大鼠DAF基因,并筛选出pPIC9K载体中的DAF阳性克隆,证实所获得相对分子质量约为70×103大小的重组蛋白具有大鼠DAF蛋白的抗原性和生物学活性.结论 采用分子克隆的方法成功构建大鼠DAF蛋白的毕赤酵母真核表达载体,能为补体及免疫研究提供高效的大鼠DAF蛋白来源.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张朋	四川大学华西医院泌尿外科	37	111	6.0	9.0
2	张立	四川大学华西医院移植免疫实验室	76	349	10.0	14.0
3	王巍	四川大学华西第二医院病理科	30	89	6.0	8.0