猪瘟病毒糖基化E2蛋白在重组杆状病毒中的表达与鉴定

• 作者: 张纹纹 李文良 杨蕾蕾 毛立 江杰元 王小敏
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 E2蛋白 糖基化 杆状病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 341-345
• 页数: 5页
• 分类号: S858.28
• 字数: 3481字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.02.019

摘要

为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTM HT B载体中,筛选获得阳性重组质粒pF-ge2,转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-ge2.在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-gE2.Western-blot试验结果表明,重组蛋白得到正确表达,具有良好的抗原性；用糖苷酶PNGaseF处理后重组蛋白分子量减小到40 000,证明重组蛋白为糖基化蛋白.这为进一步研究E2蛋白的功能及CSFV新型亚单位疫苗的开发奠定了基础.