猪链球菌2型溶血素成熟蛋白的原核表达及其生物学特性与免疫保护性

• 作者: 何孔旺 俞正玉 倪艳秀 吕立新 周俊明 张雪寒 汪伟 温立斌 茅爱华
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪链球菌2型 溶血素成熟蛋白 原核表达 生物学特性 免疫保护性
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 335-340
• 页数: 6页
• 分类号: S859.79+7
• 字数: 4505字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.02.018

摘要

根据猪链球菌2型溶血素(SLY)的基因序列设计引物,以江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增除信号肽序列外的溶血素成熟蛋白基因,并克隆到表达载体pET-32α(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3).重组菌经1mmol/L IPTG诱导,在37℃下4h时表达产物(分子量约为7.2× 104)达到高峰,表达量约占菌体总蛋白质的20％,表达产物在上清和包涵体中各占一半.将上清经镍柱亲和层析纯化,纯化蛋白质经Western blotting鉴定呈阳性,对绵羊红细胞、鸡红细胞的溶血效价分别为1.707×105 HU/mg、4.267× 104 HU/mg,并可引起HEp-2和Vero细胞的颗粒增多、圆缩和脱落.纯化蛋白质对BALB/c小鼠的免疫保护率为83.3％ (5/6).这为进一步研究SLY致病机理和研制猪链球菌新型疫苗奠定了基础.