茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)实时荧光定量 PCR 检测方法的优化及应用

• 作者: 张传溪 殷坤山 肖强* 袁志军
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 农学
• 关键词: EoNPV SYBR Green I 定性定量 检测
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 229-236
• 分类号: S435.711
• 字数: 4704字
• 语种: 中文

摘要

选用茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)基因组中序列特异性很高的 p16基因为目标基因,通过设计引物、PCR 扩增、目的片段与载体连接转化获得含 p16基因的重组质粒进行测序,进而以经测序鉴定的 p16基因的 PCR 纯化产物作为实时荧光定量 PCR 标准品模板,稀释后建立 SYBR Green I 荧光定量标准曲线,统计分析显示标准品浓度的对数值与 Ct 值之间存在良好的线性关系(R2=0.9981).该方法的检测灵敏度为102,扩增产物形成单一的特异性熔解峰,组内组间变异系数均小于3%.同时分别对含有其他茶树害虫病毒和不同浓度的茶尺蠖病毒产品的样品进行检测,能明确样品中是否含有 EoNPV 及含量.根据已建立的方法对感染病毒后不同时间段的茶尺蠖幼虫进行检测,每克幼虫样本内 p16基因拷贝数的增殖倍数对数值与感染时间呈正相关(R2=0.9935),可以获得茶尺蠖幼虫感染病毒后不同时间的增殖动态.上述结果表明,该方法能定性定量鉴定茶尺蠖核型多角体病毒,可用于茶尺蠖核型多角体病毒类生物农药的检测和感染过程检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	殷坤山	中国农业科学院茶叶研究所	52	314	10.0	13.0
2	张传溪	浙江大学应用昆虫学研究所	69	719	14.0	23.0
3	袁志军	中国农业科学院茶叶研究所	2	8	1.0	2.0
4	肖强*	中国农业科学院茶叶研究所	1	8	1.0	1.0