猪白细胞介素6和α干扰素基因的融合及其原核表达

• 作者: 刘丽仙 张永云 李卫真 王配 王锐 苗永旺 赵跃 钱林东 霍海龙
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 白细胞介素6 α干扰素 基因融合 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 329-334
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4447字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.02.017

摘要

为了获得猪白细胞介素6(IL6)和α干扰素(IFNα)双重活性的融合蛋白,研究其作为免疫佐剂的可行性,利用IL6和IFNα基因的编码区序列以及原核表达载体pET32a序列,设计了带有限制性内切酶位点、Linker序列以及His标签的特异性引物扩增出猪IL6和IFNα的成熟肽基因序列,并分别与克隆载体pMD18连接后转化Escherichiα coli DH5α,提取质粒酶切并连接构建重组质粒pMD 18-IL6-IFNα.将该重组质粒和表达载体pET32a同时酶切并连接构建pET32-IL6-IFNα重组质粒,依次转化E.coli DH5α和E.coli Rosetta (DE3)感受态细胞,并经不同终浓度的IPTG以及不同时间的诱导表达.结果成功构建了IL6和IFNα的融合表达载体,SDS-PAGE检测pET32-IL6-IFNα融合蛋白在E.coli Rosetta (DE3)中得到了较高表达,且经1.00 mmol/L IPTG诱导7.0h后表达量最大,目的蛋白的相对分子量为44 960,与理论预期值一致.SDS-PAGE检测显示融合蛋白主要以不溶性的包涵体形式存在.