应用iTRAQ技术筛选高转移和低转移肺腺癌细胞中差异表达的膜蛋白

• 作者: 姚明 孔韩卫 孙磊 张方琳 李静 林河春 耿沁 赵方瑜
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 肺肿瘤 膜蛋白质类 肿瘤转移 iTRAQ
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 150-156
• 页数: 7页
• 分类号: R734.2
• 字数: 4505字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2013.02.008

摘要

目的:筛选高转移和低转移肺腺癌细胞中差异表达的膜蛋白,以寻找肺癌的生物学标志物或治疗的潜在靶点.方法:提取具有相同来源、不同转移潜能的肺腺癌SPC-A-1和SPC-A-1 sci细胞的膜蛋白,应用核素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术标记膜蛋白,联合纳升液相色谱和串联质谱(nano liquid chromatography-tandem mass spectrometry,Nano-LC-MS/MS)分离、分析肽段,采用Proteinpilot 4.0软件对蛋白进行鉴定和定量分析,对获得的差异蛋白进行GO (Gene Ontology)分析,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法进行验证.结果:样品进行4次Nano LC-MS/MS,鉴定出符合假阳性率＜1％的分别有1 413、1 374、1 297和1 351个蛋白,标记率＞95％,其中4次都上调的蛋白有27个(膜蛋白20个)、下调的蛋白有32个(膜蛋白25个).GO分析显示,差异蛋白的分子功能主要集中在细胞骨架蛋白结合、同源蛋白结合和酶结合.生物学进程主要集中在代谢进程和细胞定位.SPC-A-1 sci细胞中ITGA3(integrin alpha-3)、MYH9 (myosin,heavy chain 9)、PLEC1 (plectin 1)、HADHA (3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase)、HK1(hexokinase-1)、KTN1 (kinectin 1)、ESYT1 (extended synaptotagmin-like protein 1)、ALDH18A1 (aldehyde dehydrogenase 18 family,member A1)、ATP5A1 (ATP synthase alpha-subunit)、LMNB2 (lamin-B2)、CAV1(caveolin-1)和CK-19 (keratin,type Ⅰ cytoskeletal 19) mRNA的表达水平以及CLTC (clathrin,heavy chain)、HK1、LMNB2和CK-19蛋白的表达水平均高于SPC-A-1细胞,与质谱定量结果一致.结论:iTRAQ联合NanoLC-MS/MS技术能高通量地筛选与转移相关的膜蛋白,为肺腺癌患者转移的诊断和预后提供可能的生物学标志物或治疗靶点.