艾滋病相关支原体多重实时荧光聚合酶链反应检测方法的初步建立

• 作者: 何利华 张建中 王艳冬 赵飞
• 来源期刊: 疾病监测
• 学科: 医学
• 关键词: 穿透支原体 发酵支原体 梨支原体 艾滋病相关支原体 多重实时荧光聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 148-152
• 分类号: R512.91
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种快速、灵敏和特异的艾滋病相关支原体(穿透支原体、发酵支原体和梨支原体)多重实时荧光聚合酶链反应(Multiplex real-time PCR)检测技术.方法 使用Beacon Designer 7.0软件在穿透支原体和发酵支原体的ftsZ基因以及梨支原体的rpoB基因保守区域设计多重引物及荧光探针,建立并优化艾滋病相关支原体Multiplex real-time PCR检测体系.分别使用3种支原体阳性质粒标准品评价体系的灵敏度,使用8种其他支原体、14种常见致病菌和人类基因组核酸评价该体系的特异度,并与普通聚合酶链反应(PCR)检测方法进行比较.结果 该Multiplex real-time PCR方法对穿透支原体和发酵支原体检测灵敏度为103拷贝,约为普通PCR的10倍,对梨支原体检测灵敏度为102拷贝,约为普通PCR 100倍.该体系对8种其他支原体、14种常见致病菌和人类基因组均不能扩增.结论 本研究建立的Multiplex real-time PCR方法可同时快速、准确的检测穿透支原体、发酵支原体和梨支原体.有望用于临床标本检测,完善对艾滋病相关支原体的检测能力.