SET基因shRNA慢病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达鉴定

• 作者: 刘建军 叶金波 周丽 李杰 杨细飞 蒋英芝 黄新凤 黄海燕
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 生物学
• 关键词: SET RNA干扰 慢病毒 载体
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 44-47,52
• 页数: 5页
• 分类号: Q782|Q786
• 字数: 3639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2013.01.010

摘要

目的:构建SET基因shRNA慢病毒表达载体,为研究SET在三氯乙烯毒性机制中的作用提供技术支持.方法:通过NCBI检索SET序列,设计合成5对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体pLVX-shRNA1 vector.挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒.将质粒共转染到293T细胞,收集病毒上清,转导入L-02肝细胞中,利用嘌呤霉素筛选得到SET缺陷型细胞,最后利用荧光定量PCR和Western blot鉴定干扰效果.结果:PCR和测序结果证明双链shRNA正确插入慢病毒载体pLVX-shRNA1vector,共转染293T细胞得到高滴度病毒,转导L-02细胞筛选出SET基因缺陷型细胞.结论:利用慢病毒介导的RNAi技术成功构建了SET基因缺陷型细胞.