茶树丝氨酸羧肽酶基因的克隆及表达分析

• 作者: 仇传慧 刘亚军 夏涛 李伟伟 李明卓 王云生 骆洋 高丽萍*
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 丝氨酸羧肽酶 生物信息学分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 202-210
• 分类号: S571.1|Q946.5
• 字数: 5465字
• 语种: 中文

摘要

近年来,人们发现丝氨酸羧肽酶类蛋白(SCPL)参与植物次生代谢产物的酰基转移过程,即具有转酰基功能.本研究采用 RT-PCR 技术,获得了3个茶树丝氨酸羧肽酶基因的全长序列;生物信息学分析表明,3个 CsSCPL蛋白均包含了1个底物结合位点、3个催化作用保守区和多个 N-糖基化位点,及其 Ser-Asp-His 三联体催化中心等 SCPL 家族的典型特征;进化树分析表明,3个 CsSCPL 可能具有酰基转移酶的功能.实时荧光定量 PCR 结果表明3个基因在芽叶茎根中都有表达,其中,CsSCPL1和 CsSCPL3在叶中的相对表达量明显高于茎和根,而CsSCPL2则在根中高表达.本研究成功地将 CsSCPL 重组到表达载体 pET32a(+)上进行原核表达,并对诱导时间及诱导温度进行了优化;经 IPTG 诱导、SDS-PAGE 检测,目标蛋白条带分子量为70 kD,与预测大小相符.