多杀性巴氏杆菌PurF蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 刘家森 原冬伟 姜骞 崔玉东 张爱芹 曲连东 林欢 郭东春
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 多杀性巴氏杆菌 purF基因 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: S852.612|Q786
• 字数: 3324字
• 语种: 中文

摘要

为了获得多杀性巴氏杆菌PurF蛋白及其多克隆抗体,通过PCR扩增了多杀性巴氏杆菌C51-17株purF基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,构建重组表达质粒pHT-PurF,转化至大肠埃希菌BL21 (DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达.SDS-PAGE检测表明,获得重组蛋白分子质量约56.5 ku,主要以包涵体形式存在；Western blot检测表明,表达的蛋白可与多杀性巴氏杆菌制备的高免血清发生特异性反应.将制备的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA检测血清抗体效价,结果显示制备的多克隆抗体滴度达到1∶128 000,Western blot表明可与多杀性巴氏杆菌PurF蛋白发生反应.本研究制备了多杀性巴氏杆菌的PurF蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究PurF蛋白在多杀性巴氏杆菌致病中的作用奠定了基础.