平榛脱水素基因的克隆与表达分析

• 作者: 刘庆忠 梁丽松 王贵禧 赵天田 陈新 马庆华
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 平榛 ChDHN qRT-PCR 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 果树
• 页码范围: 32-40
• 分类号: S664.4
• 语种: 中文

摘要

以平榛(Corylus heterophylla Fisch.)花芽为试材,采用RT-PCR和RACE方法克隆了一个平榛与脱水素基因同源的cDNA基因,命名为ChDHN(GenBank登录号HM228389),其全长639 bp,具有一个504 bp的潜在编码区,编码167个氨基酸组成的多肽,具有LEA类家族成员具有的特征多肽序列,属于Y4SK2类型DHN基因,预测ChDHN蛋白质分子量18.03 kD,预测其理论等电点为7.28.对ChDHN的时空表达特性进行了研究,以Actin为内参,对ChDHN在4℃冷激条件下(0、2、4、8、24和48 h)的表达模式进行了初步的研究,冷激处理后ChDHN表现逐渐上调的表达趋势,24 h达到最大表达量,48 h表达量降低;推测ChDHN属于植物冷适应调节网络中的应答基因;定量RT-PCR分析ChDHN在不同器官中的表达,在种子中高丰度表达,其次是雄花序和花芽,在树皮中表达最低.用PCR、酶切和测序鉴定等方法检测已成功构建重组表达载体pET-32a(+)-DHN,将鉴定完全正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经SDS-PAGE分析并经过Western blotting鉴定,表明重组蛋白被IPTG诱导后高效表达出一条比预测分子量18.03 kD大4kD的融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘庆忠		192	2971	28.0	45.0
2	梁丽松	中国林业科学研究院林业研究所林木遗传育种国家重点实验室	94	1467	22.0	31.0
3	陈新		4	30	3.0	4.0
5	马庆华	中国林业科学研究院林业研究所林木遗传育种国家重点实验室	21	169	8.0	12.0
6	赵天田	中国林业科学研究院林业研究所林木遗传育种国家重点实验室	4	21	2.0	4.0