沉默bim的表达对缺氧所致大鼠心肌细胞凋亡的影响

• 作者: 丁浩 吴延庆 夏珍 孙国芳 李菊香 洪葵 程晓曙
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Bim蛋白 小干扰RNA 心肌细胞 缺氧 细胞凋亡 p38丝裂原激活蛋白激酶类
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1771-1776
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 4543字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.10.008

摘要

目的:探讨唯BH3域蛋白Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)在缺氧所致大鼠心肌细胞凋亡中的作用.方法:在体外原代培养出生l～3d的大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定.设计并化学合成3对靶向bim的siRNA,用脂质体法将siRNA转染心肌细胞,筛选沉默效率最高的siRNA.实验分组:(1)正常对照组；(2)缺氧组；(3)缺氧+脂质体组；(4)缺氧+阴性对照siRNA组；(5)缺氧+bim-siRNA 组.倒置显微镜下观察心肌细胞的搏动频率和节律.全自动生化分析术检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,用MTT法测定心肌细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.Western blotting检测细胞Bim、Bax、Bcl-2和p-p38 MAPK和p38 MAPK蛋白的表达.结果:免疫组化鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功.bim-siRNA转染均能有效沉默bim基因的表达(P＜0.01),其中第2对沉默效率最高,达到86.73％.缺氧使心肌细胞的搏动频率显著减慢,节律不规则,而沉默bim基因的表达能使细胞搏动频率增加.缺氧损伤导致细胞培养液中LDH含量较空白对照组明显增加(P＜0.01),心肌细胞存活率明显下降(P＜0.05),细胞凋亡率较空白对照组明显增加(P＜0.01),转染bim-siRNA后细胞培养液中LDH含量显著减少,细胞存活率升高,细胞凋亡率下降.缺氧损伤导致心肌细胞Bax和p-p38 MAPK表达升高(P＜0.05或P＜0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P＜0.01),bim-siRNA的转染能够抑制缺氧导致的上述改变(P＜0.01或P＜0.05),并且与心肌细胞凋亡发生率降低一致,p38 MAPK表达无明显变化.结论:沉默bim的表达能有效抑制缺氧导致心肌细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制Bax、p-p38 MAPK的表达和增强Bcl-2蛋白表达有关,这有望为冠心病的治疗提供新方向.