鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的纯化和复性研究

• 作者: 刘景晶 张鹏 徐茂磊 曹荣月 李飞 汤啸天 葛驰宇 陈檬
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 包涵体 聚乙二醇 纯化 复性 生物活性
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 386-391
• 页数: 6页
• 分类号: Q813
• 语种: 中文

摘要

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种造血生长因子和促炎细胞因子.重组鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在抗肿瘤及抗炎研究中有着极其重要的作用.以NcoⅠ和BamHⅠ为酶切位点将mGM-CSF编码序列插入到pET-28a载体中.转染E coli宿主菌BL21后得到以包涵体形式表达的蛋白,表达量占菌体总蛋白量51.6％.包涵体的纯化条件在实验中进一步优化,然后溶解于8 mol/L尿素中.采用稀释法在2 mol/L尿素缓冲液中添加PEG对蛋白进行复性.复性后的产物经过离子交换层析纯化后得到高纯度的有活性的mGM-CSF.通过体内白细胞计数和体外髓样细胞增殖检测表明纯化的蛋白具有mGM-CSF全部的生物活性.这种制备方法能够从每升发酵液中获得8.06 mg蛋白,具有蛋白表达量高,复性和纯化方法简便易得的特点,适用于规模生产.