hMSH2和hMSH6蛋白相互作用体系的建立与hMSH2基因错义突变的功能评估

• 作者: 朱妍蓓 朱明 王亚平 范怡梅
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 关键词: hMSH2基因 错义突变 酵母双杂交 结直肠癌
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 559-564
• 页数: 6页
• 字数: 5615字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2013.05.011

摘要

目的 建立hMSH2和hMSH6蛋白相互作用体系,以评估检出的hMSH2基因错义突变的功能意义.方法 应用基因克隆技术构建重组质粒pGADT7-hMSH2、pGBKT7-hMSH6及7个不同hMSH6结构域的重组pGBKT7质粒.通过定点诱变技术构建10个pGADT7-hMSH2突变质粒.将重组质粒共转化酵母AH109菌株,观察转化子在组氨酸缺陷型培养基上的生长状况.结果 hMSH6蛋白的MutSⅡ-Ⅴ、MutSⅢ-Ⅴ结构域分别与hMSH2蛋白在酵母AH109中具有双杂交作用.以pGBKT7-hMSH6-MutSⅡ-Ⅴ和pGADT7-hMSH2在酵母AH109的相互作用为基础建立hMSH2/hMSH6相互作用平台.与野生型hMSH2相比较,c.505A＞G、c.1168C＞T、c.1255C＞A、c.1261C＞A突变体在组氨酸缺陷的培养基上生长正常；c.1223A＞G、c.1886A ＞G、c.2108C＞A、c.2516A＞G突变体生长缓慢；c.518T＞G和c.1664 delA突变体不生长.结合文献中病例对照、氨基酸改变分析,判定c.518T＞G为病理性突变；c.1223A＞G、c.1886A＞G、c.2108C＞A、c.2516A＞G为疑似病理性突变；c.505A＞G、c.1168C＞T、c.1255C＞A、c.1261C＞A为正常变异.结论 初步建立了hMSH2、hMSH6蛋白相互作用功能分析平台,并将其用于hMSH2基因错义突变的功能评估.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱明	210093 南京大学医学院江苏省医学分子技术重点实验室	2	2	1.0	1.0